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NEST细胞培养的培养步骤你知道吗
点击次数:5 发布时间:2019-09-26
   NEST细胞培养在药理学中的应用比较广泛。通过NEST细胞培养的生长曲线可计数细胞增长的指数,从而可以直观地了解细胞生长与死亡的动态变化,一般用于检测各种药物对细胞生长的影响。利用培养细胞的放射自显技术,研究细胞的物质代谢、动态变化和细胞周期等,对于药物作用机制的研究有重要作用。细胞培养可用于抗动脉粥样硬化、血糖等药物的研究等应用。
 
  在NEST细胞培养过程中,经常加入5%-20%的胎牛血清,常使用的BI胎牛血清浓度是10%。高浓度的血清可能改变细胞的基因表达谱,影响后续实验的结果,我们在实验中使用10%的BI澳洲胎牛血清培养NEST细胞,效果非常好。但是有些细胞也会使用5%的BIFBS或者20%的BI胎牛血清,要根据具体细胞选择合适的BI胎牛血清浓度。
 
  首先,倒掉旧的培养基,加入3ml新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。(巨噬细胞我们只吹打,不消化的)
 
  其次,把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内,培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次,20分钟,30分钟观察一次。选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁的情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中的培养基,加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。
 
  如果一次效果还不理想,可重复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意,结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。老化的会比较多,对后期实验结果是不好的。所以在NEST细胞培养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题.